无菌技术的规范

[述职报告的规范格式]述职报告是指各级各类机关工作人员，主要是领导干部向上级、主管部门和下属群众陈述任职情况，包括履行岗位职责，完成工作任务的成绩、缺点问题、设想，进行自我回顾、评估、鉴定的...+阅读

（一）生物安全柜及垂直层流台内的无菌技术

1、操作人员应严格遵守SOP有关着装、洗手和正确使用安全柜的规定。

2、准备好调配所需的物料。

3、在应用前检查所有的物品包装、容器和器械设备，确认其完好无损。

4、在物料放入洁净室前，必须先用浸有75%乙醇的无菌纱布擦拭整个操作台，物料进出安全柜的次数应最小化。

5、所有物品的安放应便于调配。合理划分工作区域，明确留下中央区域用来操作。如果一次要配一袋以上，其摆放必须合理，防止混淆。

6、在安全柜内侧至少15cm处做所有的无菌操作，这一距离可防止来自于工作人员身体的反射性污染，以及来自于层流室内两个气流相互作用产生的干扰气流的回流污染，牢记高效过滤器的气流是从（身体的）远侧端到近侧端，而且在关键的位置决不能干扰高效滤过气流。

7、制定良好的工作计划：尽可能靠近滤器端做最重要的工作。

8、所有的操作中，手指和手都必须刻意地放在关键位置的气流下方，也就是它的后面，否则将会干扰气流并可能使手指上的污染直接进入关键部位。

9、在插入针头前，西林瓶和输液袋的胶塞表面、加药口、安瓿的颈部必须用75%乙醇消毒。

10、当持有连接器做接通操作时，应与气流成直角进行，同样也需要保持手在关键部位的后面。

11、调配要尽可能快，必须保持无菌状况，进出安全柜的次数应达到最小化。

12、避免任何物质喷射入高效过滤器内。打开安瓿的方向应远离高效过滤器，调整注射器容量和传递导管时也要小心。

13、最后，对配好的产品应检查是否缺损，及有无任何不相容的物理性变化或降解。

（二）注射器、针头、西林瓶、安瓿的无菌技术

1、请在生物安全柜或垂直层流台内打开注射器与针头的外包装。

2、西林瓶：用75%乙醇消毒胶塞时，应以固定的手法、相同的方向：在胶塞的同一点上用针尖及斜面后部穿刺；由于西林瓶是封闭性容器。所以应注入与吸出的液体容量相同体积的空气；当向粉末中加入稀释剂时，必须去除与稀释剂量等容的空气以防在操作西林瓶时产生正压。

3、安瓿：合理打开安瓿，用75%乙醇消毒后，用拇指及食指握住安瓿的颈部。

在远离身体处以快速、固定、突然折断的方法来打开它，打开时不要对着高效过滤器，从安瓿中抽取药物，倾斜安瓿，将针尖斜面置于接近开口的角上，拉回注射器推杆以抽取溶液。

实验前准备：4个培养皿，2支移液管，1支涂布棒，并将培养皿包好灭菌，取一定的蒸馏水灭菌制成无菌水。

1、配制营养琼脂培养基：称取营养琼脂9.6g，加入300ml蒸馏水，加热煮沸后将培养基导入锥形瓶，然后包扎灭菌（121°C,20min）。

2、倒平板：在无菌环境操作下，将上述培养基倒入4个平板，并编号1,2,,3,4.

3、制菌悬液：用5ml无菌移液管在无菌操作下，吸取3ml无菌水到菌种斜面，用接种环轻刮下菌苔，捣碎，塞上棉塞，振荡片刻。

4、将抗生素稀释成10-3,10-4,10-5,10-6四种不同稀释度的梯度液。

5、取直径1cm圆形滤纸若干，取4个圆形滤纸分别放入10-3,10-4,10-5,10-6的抗生素溶液中浸泡一会。

6、待平板凝固后接种，各取0.2ml菌悬液倒入平板中，用涂布棒抹匀。

7、在1,2,3,4，号已接种的平板中分别放入4个浸泡在10-3,10-4,10-5,10-6抗生素溶液中的滤纸片，并注意个纸片间的距离应较大。

8、培养，放入37°c恒温箱中培养24h。

9、观察测量并记录数据，观察抗生素滤纸周围的透明抑菌圈，测量16个抑菌圈的大小，算不同浓度抗生素滤纸抑菌圈的大小。