【摘要1目的 比较微量取样与一次取样的优劣。方法36只家兔分为4组(每组9只)，于死后12 h取样：i组于一次取

出所有vh；ii组微量取样50 l，连续取15次；iii组左眼一次取样。右眼微量重复取样

。iv组双眼第1次微量取样．剩余一次

取出。检测ca2+cl 、l(+、na 和p等含量，数据统计分析。结果 iii组

左右眼、(iv)组先后两次取样配对t检验无差异(p>0

．05)，

各组微量取样样本的变异系数、双眼差较小。结论 微量取样的操作影响较小、稳定性和重复性好

． 更适合法医学研究和应

用。

【关键词】尸体化学；玻璃体液：取样方法：比较

【中图分类号】d919．1

【文献标识码】a

【文章编号】1007—9297(2006)03—0208—03

a parison study of vitreous humor micro-sam pling and wholly sam pling on rabbits． zha ng yu—zhuj，w a ng lan2．3．

liu l ，(department offorensic me dicine，ton#ji medical college ofhuazhong university ofscience arm techno ，w han

430030,chian)

[abstract]objective to make a parative study of wholly sampling and micro-sampling of vitreous humor(vh)．

methods

【作者简介】战玉祝(1968一)，男，汉族，山东莒南县人，医学学士，副主任法医师

， 研究方向：临床法医学中的视觉、听觉的电生理研究以

及法医病理的死亡时间研究；tel~+86—531—86323203；e-mail：james6803#21cn．

【通信作者1刘良(1960一)，男，汉族，山东沂水人，教授，博士生导师，主要从事法医病理学教学

、研究及检案。

法律与医学杂志2006年第13卷(第3期)

thirty—six rabbits were divided into four groups，each of which contains nine．all were sampled at 12h postmortem．group 1 were

wholly extracted． group i1 were subjected to multiple sampling． of group iii， all left eyes were wholly sampled and all right eyes

were micro-sampled．all eyes of group iv were micro—sampled at first and all the left were wholy sampled．concentrations of calcium，

chloride，potassium，sodium and phosphorus were detected and statistically analyzed．results th ere are no significan t difference

between wholly sampling and micro-sampling of the pair-matched t—test of between-eyes in group iii and the twice sanipiing

in group iv．of micro—sam pling，the variations of the both-eyes and coeficient of variation were smaller than those of whony

sam pling． conclusion th e multi-micro-sam pling operation makes much less distort on vh， and is more stab le and repeatable，

which is promising for forensic vh study an d examination．

【key words l postmortem chemistry；vitreous humog sampling methodology； 12全文查看parison study

取样方法对玻璃体液(vitreous humor，vh)研究

有重要意义，[11传统采用一次取样vh，近年有研究使

用了微量取样。迄今未见两取样方法比较研究，本实

验通过一次取样与微量取样的比较． 旨在为vh研究

选择取样方法。

材料与方法

一

、实

验动物及分组取材

健康家兔36只，雌雄混用，体重1．9～2．5 ，由华

中科技大学同济医学院实验动物中心提供。耳缘静脉

空气栓塞处死，置于4～7℃恒温箱，随机分为4组(每

组9只)，于死后12h取样：i组根据coe推荐的方法，

用20g针头5 iill注射器自外眦、角膜缘外约2 mm

处缓慢进针，瞳孔观察针头位于中央时缓慢抽出所有

vh，摇匀后移液50 l与去离子水1：4稀释，编号入

ep管、-25℃冻存。ii组微量重复取样：用20 g留置

针，入针后固定针头，用1 ml注射器缓慢抽吸、移液

50 l，重复取样15次，其余处置同i组。iii组左眼一

次取样，同i组，右眼微量重复取样同ii组。iv组双眼

微量取样1次，操作同ii组；换5 iid注射器一次取出

剩余所有vh，同i组。

二、检测

同日检测i组、iv组

1、2次取样和iii组左眼样

本，ii组和iii组右眼第1⋯5 8 15次取样样本：37 ci=

水浴解冻，美国abboty aeroset 2000全自动生化分

析仪检测ca2+、cl

一、i<+、na+和p浓度。检测3次，取平均

值。

三、统计分析

检测数据根据参考文献『31，采用excel和spss 12．0

分析软件进行统计分析：计算各组变异系数，ii组进行

方差分析，iii组左右眼配对t检验，iv组1，2次取样

配对t检验，分别计算iv组1，2次取样双眼浓度差与

双眼均值的比。

结果

实验所得结果及统计处理情况见表

1、表

2、表3。

表1各组变异系数(cv。％)

table1 coeficient of variation in group i，ii，iii and iv (cv，％)

表2 ii组方差分析结果 值)

table2 variance analysis of group ii(p value)

表3 iv组双眼差(绝对值)与双眼均值的平均比(％)

table 3 ratio of erage vanations to means in betweeneyes

of group iv(％)

讨论

一

、取样方法与变异程度

重复微量取样方差分析提示总体vh样本物质含

量无显著差异(表2)，iii组和iv组一次取样与微量取

样的t检验无差异(p>0．05)，因此两取样方法获得的

样本总体无差异。但是，一次取样的弥散程度大于微

量取样(表1)，这印证了coe关于“取样方法不当可造

成vh含量分散”的观点。这也反应在双眼浓度差上．

微量取样的双眼差较小、一次取样较大(表3)。

结果与有关报道都相吻合：一次取样研究报道的

· 210 ·

vh浓度变异程度和双眼问差异较大， 而微量取样研

究所报道的差异则往往较小。[7-91结合前期研究，[11分

析认为取样方法是造成差异的原因。物质在vh、血液

和组织中含量不同， 取样操作不当引起组织挫碎或污

染改变了vh样本含量。coe方法的缺点之一是“尽量

取出所有vh”不好控制．实际操作时容易抽出邻近组

织(如视网膜)，造成组分(如vh钾)含量的人为改变。

tagliaro[91也认为微量取样对眼球内壁组织的作用较

小．操作引起的损伤和组分改变也较小，取得的样本

更好。

二、微量取样的法医学意义

微量取样操作方法的文献少见，设计微量取样操

作时参考了coe方法的基本步骤。为方便多次取材、

减少进针次数、保持针头位置和尽量减少污染等，采

用了留置针固定后定量(微量)移液的取材方法。

tagliaro等[91 4次取样50 lvh获得了较好的死亡时

间推断精度，rognum等[1

11、poulsen等[121和bocaz—ben

eventi等【8】也采用微量取样的方法，并称死亡时间95％

预测区间更好。结合本实验结果。作者认为这与微量

取样的变异较小有关。微量取样所体现的较小的双眼

差，也更符合实际。111因此微量取样采集样本具有良好

的代表性，稳定性和重复性更好，也容易控制操作，更

适宜于vh的法医学研究与应用

综上所述，微量取样与一次取样总体无差别，但

不同取样操作可以造成样本均数变异系数的不同．比

较而言，微量取样的弥散程度较小，变异程度和双眼

差较小。微量取样操作对样本的影响较小，其稳定性

和重复性较好，更适合法医学vh研究应用

参考文献

『11汪岚，战玉祝，刘茜，等．家免死后玻璃体液离子浓度的微量重复取样

法律与医学杂志2006年第13卷(第3期)

法[j】．中国法医学杂志，2006，21(3)5～7

[2】coe ji．postmortem chemistry update．emphasis on forensic application

[j1．am j forensic med pathol，1993．14(2)：91～117

[3】余松林．医学统计学．北京：人民卫生出版礼，2003．40~41，44-56，l18-

129

[4】madea b，henssge c，honig w，et a1．references for determining the

time of death by potassium in vitreous humor[jll forensic sci int，

l 989．40(3)：23 1-243

[5】pounder dj，carson do，johnston k，et a1．electrolyte concentration

differences between left and right vitreous humor samples[j]．j foren—

sic sci，1998，43(3)：604-607

[6】gardiner ee，newberry rc，keng jy．postmortem time and storage

temperature affect the concentrations of hypoxanthine， other purines，

pyrimidines，and nucleosides in ian and porcine vitreous humor[j]．

pediatr res，1989，26(6)：639-642

[7】gardiner ee，newberry rc，keng jy．postmortem time and storage

temperature affect the concentrations of hypoxanthine， other purines，

pyrimidines，and nucleosides in ian and porcine vitreous humor[j]．

pediatr res，1989，26(6)：639-642

[8]bocaz—beneventi g，tagliaro f，bortolotti f，et a1．capillary zone elec—

trophoresis and artificial neural works for estimation of the post—

mortem interval using electrolytes measurements in human vitreous hu—

mour[j]．int j legal med，2002，116(1)：5-11

[9】tagliaro f，bortolotti f，mato g，et a1．potassium concentration differences

in the vitreous humour from the two eyes revisited by micro．

analysis with capillary electmph0resis[j1．j chromatogr a，2001，924

f1-2)：493-498

[1o]郑建中．眼的生化概要[m]．北京：人民卫生出版礼，1991．111-128

[11】rognum to，hauge s，oyasaeter s，et a1．a new biochemical method

for estimation of postmortem time[j]．forensic sci，1991，51(1)：139～

146

[12】poulsen jp，oyasaeter s，sanderud j，et a1．hypoxanthine，xanthine，

and uric acid concentrations in the cerebrospinal fluid，plasma

， an d

urine of hypoxemic pigs[j]．pediatr res，1 990，28(5)：477～48 1

(收稿：2006—05—23) 12全文查看【摘要1目的 比较微量取样与一次取样的优劣。方法36只家兔分为4组(每组9只)，于死后12 h取样：i组于一次取

出所有vh；ii组微量取样50 l，连续取15次；iii组左眼一次取样。右眼微量重复取样

。iv组双眼第1次微量取样．剩余一次

取出。检测c2+cl 、l(+、n 和p等含量，数据统计分析。结果 iii组

左右眼、(iv)组先后两次取样配对检验无差异(p&;0

．05)，

各组微量取样样本的变异系数、双眼差较小。结论 微量取样的操作影响较小、稳定性和重复性好

． 更适合法医学研究和应

用。

【关键词】尸体化学；玻璃体液：取样方法：比较

【中图分类号】d919．1

【文献标识码】

【文章编号】1007—9297(2006)03—0208—03

prison sudy of virous humor micro-sm plin nd wholly sm plin on rbbis． zh n yu—zhuj，w n ln2．3．

liu l ，(dprmn offornsic m dicin，on#ji mdicl coll ofhuzhon univrsiy ofscinc rm chno ，w hn

430030,chin)

[bsrc]objciv o mk priv sudy of wholly smplin nd micro-smplin of virous humor(vh)．

mhods

【作者简介】战玉祝(1968一)，男，汉族，山东莒南县人，医学学士，副主任法医师

， 研究方向：临床法医学中的视觉、听觉的电生理研究以

及法医病理的死亡时间研究；l~+86—531—86323203；-mil：jms6803#21cn．

【通信作者1刘良(1960一)，男，汉族，山东沂水人，教授，博士生导师，主要从事法医病理学教学

、研究及检案。

法律与医学杂志2006年第13卷(第3期)

hiry—si rbbis wr dividd ino four roups，ch of which conins nin．ll wr smpld 12h posmorm．roup 1 wr

wholly rcd． roup i1 wr subjcd o mulipl smplin． of roup iii， ll lf ys wr wholly smpld nd ll rih ys

wr micro-smpld．ll ys of roup iv wr micro—smpld firs nd ll h lf wr wholy smpld．concnrions of clcium，

chlorid，possium，sodium nd phosphorus wr dcd nd sisiclly nlyzd．rsuls h r r no sinificn diffrnc

bwn wholly smplin nd micro-smplin of h pir-mchd —s of bwn-ys in roup iii nd h wic snipiin

in roup iv．of micro—sm plin，h vriions of h boh-ys nd coficin of vriion wr smllr hn hos of whony

sm plin． conclusion h muli-micro-sm plin oprion mks much lss disor on vh， nd is mor sb l nd rpbl，

which is promisin for fornsic vh sudy n d minion．

【ky words l posmorm chmisry；virous humo smplin mhodoloy；[]prison sudy

取样方法对玻璃体液(virous humor，vh)研究

有重要意义，[11传统采用一次取样vh，近年有研究使

用了微量取样。迄今未见两取样方法比较研究，本实

验通过一次取样与微量取样的比较． 旨在为vh研究

选择取样方法。

材料与方法

一

、实

验动物及分组取材

健康家兔36只，雌雄混用，体重1．9～2．5 ，由华

中科技大学同济医学院实验动物中心提供。耳缘静脉

空气栓塞处死，置于4～7℃恒温箱，随机分为4组(每

组9只)，于死后12h取样：i组根据co推荐的方法，

用20针头5 iill注射器自外眦、角膜缘外约2 mm

处缓慢进针，瞳孔观察针头位于中央时缓慢抽出所有

vh，摇匀后移液50 l与去离子水1：4稀释，编号入

p管、-25℃冻存。ii组微量重复取样：用20 留置

针，入针后固定针头，用1 ml注射器缓慢抽吸、移液

50 l，重复取样15次，其余处置同i组。iii组左眼一

次取样，同i组，右眼微量重复取样同ii组。iv组双眼

微量取样1次，操作同ii组；换5 iid注射器一次取出

剩余所有vh，同i组。

二、检测

同日检测i组、iv组

1、2次取样和iii组左眼样

本，ii组和iii组右眼第1⋯5 8 15次取样样本：37 ci=

水浴解冻，美国bboy ros 2000全自动生化分

析仪检测c2+、cl

一、i&l;+、n+和p浓度。检测3次，取平均

值。

三、统计分析

检测数据根据参考文献『31，采用cl和spss 12．0

分析软件进行统计分析：计算各组变异系数，ii组进行

方差分析，iii组左右眼配对检验，iv组1，2次取样

配对检验，分别计算iv组1，2次取样双眼浓度差与

双眼均值的比。

结果

实验所得结果及统计处理情况见表

1、表

2、表3。

表1各组变异系数(cv。％)

bl1 coficin of vriion in roup i，ii，iii nd iv (cv，％)

表2 ii组方差分析结果 值)

bl2 vrinc nlysis of roup ii(p vlu)

表3 iv组双眼差(绝对值)与双眼均值的平均比(％)

bl 3 rio of vr vnions o mns in bwnys

of roup iv(％)

讨论

一

、取样方法与变异程度

重复微量取样方差分析提示总体vh样本物质含

量无显著差异(表2)，iii组和iv组一次取样与微量取

样的检验无差异(p&;0．05)，因此两取样方法获得的

样本总体无差异。但是，一次取样的弥散程度大于微

量取样(表1)，这印证了co关于“取样方法不当可造

成vh含量分散”的观点。这也反应在双眼浓度差上．

微量取样的双眼差较小、一次取样较大(表3)。

结果与有关报道都相吻合：一次取样研究报道的

· 210 ·

vh浓度变异程度和双眼问差异较大， 而微量取样研

究所报道的差异则往往较小。[7-91结合前期研究，[11分

析认为取样方法是造成差异的原因。物质在vh、血液

和组织中含量不同， 取样操作不当引起组织挫碎或污

染改变了vh样本含量。co方法的缺点之一是“尽量

取出所有vh”不好控制．实际操作时容易抽出邻近组

织(如视网膜)，造成组分(如vh钾)含量的人为改变。

liro[91也认为微量取样对眼球内壁组织的作用较

小．操作引起的损伤和组分改变也较小，取得的样本

更好。

二、微量取样的法医学意义

微量取样操作方法的文献少见，设计微量取样操

作时参考了co方法的基本步骤。为方便多次取材、

减少进针次数、保持针头位置和尽量减少污染等，采

用了留置针固定后定量(微量)移液的取材方法。

liro等[91 4次取样50 lvh获得了较好的死亡时

间推断精度，ronum等[1

11、poulsn等[121和bocz—bn

vni等【8】也采用微量取样的方法，并称死亡时间95％

预测区间更好。结合本实验结果。作者认为这与微量

取样的变异较小有关。微量取样所体现的较小的双眼

差，也更符合实际。111因此微量取样采集样本具有良好

的代表性，稳定性和重复性更好，也容易控制操作，更

适宜于vh的法医学研究与应用

综上所述，微量取样与一次取样总体无差别，但

不同取样操作可以造成样本均数变异系数的不同．比

较而言，微量取样的弥散程度较小，变异程度和双眼

差较小。微量取样操作对样本的影响较小，其稳定性

和重复性较好，更适合法医学vh研究应用

参考文献

『11汪岚，战玉祝，刘茜，等．家免死后玻璃体液离子浓度的微量重复取样

法律与医学杂志2006年第13卷(第3期)

法[j】．中国法医学杂志，2006，21(3)5～7

[2】co ji．posmorm chmisry upd．mphsis on fornsic pplicion

[j1．m j fornsic md phol，1993．14(2)：91～117

[3】余松林．医学统计学．北京：人民卫生出版礼，2003．40~41，44-56，l18-

129

[4】md b，hnss c，honi w， 1．rfrncs for drminin h

im of dh by possium in virous humor[jll fornsic sci in，

l 989．40(3)：23 1-243

[5】poundr dj，crson do，johnson k， 1．lcroly concnrion

diffrncs bwn lf nd rih virous humor smpls[j]．j forn—

sic sci，1998，43(3)：604-607

[6】rdinr ，nwbrry rc，kn jy．posmorm im nd sor

mprur ffc h concnrions of hyponhin， ohr purins，

pyrimidins，nd nuclosids in vin nd porcin virous humor[j]．

pdir rs，1989，26(6)：639-642

[7】rdinr ，nwbrry rc，kn jy．posmorm im nd sor

mprur ffc h concnrions of hyponhin， ohr purins，

pyrimidins，nd nuclosids in vin nd porcin virous humor[j]．

pdir rs，1989，26(6)：639-642

[8]bocz—bnvni ，liro f，boroloi f， 1．cpillry zon lc—

rophorsis nd rificil nurl nworks for simion of h pos—

morm inrvl usin lcrolys msurmns in humn virous hu—

mour[j]．in j ll md，2002，116(1)：5-11

[9】liro f，boroloi f，mno ， 1．possium concnrion diffrncs

in h virous humour from h wo ys rvisid by micro．

nlysis wih cpillry lcmph0rsis[j1．j chromor ，2001，924

f1-2)：493-498

[1o]郑建中．眼的生化概要[m]．北京：人民卫生出版礼，1991．111-128

[11】ronum o，hu s，oysr s， 1． nw biochmicl mhod

for simion of posmorm im[j]．fornsic sci，1991，51(1)：139～

146

[12】poulsn jp，oysr s，sndrud j， 1．hyponhin，nhin，

nd uric cid concnrions in h crbrospinl fluid，plsm

， n d

urin of hypomic pis[j]．pdir rs，1 990，28(5)：477～48 1

(收稿：2006—05—23)【摘要1目的 比较微量取样与一次取样的优劣。方法36只家兔分为4组(每组9只)，于死后12 h取样：i组于一次取

出所有vh；ii组微量取样50 l，连续取15次；iii组左眼一次取样。右眼微量重复取样

。iv组双眼第1次微量取样．剩余一次

取出。检测ca2+cl 、l(+、na 和p等含量，数据统计分析。结果 iii组

左右眼、(iv)组先后两次取样配对t检验无差异(p>0

．05)，

各组微量取样样本的变异系数、双眼差较小。结论 微量取样的操作影响较小、稳定性和重复性好

． 更适合法医学研究和应

用。

【关键词】尸体化学；玻璃体液：取样方法：比较

【中图分类号】d919．1

【文献标识码】a

【文章编号】1007—9297(2006)03—0208—03

a parison study of vitreous humor micro-sam pling and wholly sam pling on rabbits． zha ng yu—zhuj，w a ng lan2．3．

liu l ，(department offorensic me dicine，ton#ji medical college ofhuazhong university ofscience arm techno ，w han

430030,chian)

[abstract]objective to make a parative study of wholly sampling and micro-sampling of vitreous humor(vh)．

methods

【作者简介】战玉祝(1968一)，男，汉族，山东莒南县人，医学学士，副主任法医师

， 研究方向：临床法医学中的视觉、听觉的电生理研究以

及法医病理的死亡时间研究；tel~+86—531—86323203；e-mail：james6803#21cn．

【通信作者1刘良(1960一)，男，汉族，山东沂水人，教授，博士生导师，主要从事法医病理学教学

、研究及检案。

法律与医学杂志2006年第13卷(第3期)

thirty—six rabbits were divided into four groups，each of which contains nine．all were sampled at 12h postmortem．group 1 were

wholly extracted． group i1 were subjected to multiple sampling． of group iii， all left eyes were wholly sampled and all right eyes

were micro-sampled．all eyes of group iv were micro—sampled at first and all the left were wholy sampled．concentrations of calcium，

chloride，potassium，sodium and phosphorus were detected and statistically analyzed．results th ere are no significan t difference

between wholly sampling and micro-sampling of the pair-matched t—test of between-eyes in group iii and the twice sanipiing

in group iv．of micro—sam pling，the variations of the both-eyes and coeficient of variation were smaller than those of whony

sam pling． conclusion th e multi-micro-sam pling operation makes much less distort on vh， and is more stab le and repeatable，

which is promising for forensic vh study an d examination．

【key words l postmortem chemistry；vitreous humog sampling methodology； 12全文查看