[谈混合销售行为和兼营行为的区别]文章标题:谈混合销售行为和兼营行为的区别 一、混合销售行为⑴※《细则》第五条第一款,一项销售行为如果既涉及货物又涉及非应税劳务,为混合销售行为。⑵※《细则》第五条第二...+阅读
【关键词】阴道混合物,强奸,dna
【中图分类号】d919.2;q75
【文献标识码】b
【文章编号】1007~9297(2004)01—0051—03
在法医dna检验过程中,经常会遇到多个体的混合样本,
如受害人和嫌疑人的混合样品,几个嫌疑人的混合样品。荧光
标记自动分析str系统,不仅能根
据位点等位基因的个数判断
样品是否为混合样品,而且还能根据等位基因峰面积(谱带荧光
总强度)确定混合样品中各组分的混合比例,推断混合样品中各
组分的基因分型_1j。gill等建立了利用峰面积分析混合样品的
方法_2]。本文利用该法对一宗案件中的混合样品进行了分析,
推断混合样品各组分的比例及各组分的基因分型。
材料和方法
2001年于中山某地发生一宗强奸案,送检材料为事主血纱,
嫌疑人1血纱,嫌疑人2血纱,以及在嫌疑人2住处提取的一根
带毛囊的阴毛(上沾有少量分泌液),分别编为1~4号样品。按
chelex一100法 提取dna,采用ampfi str identifiler复合扩
增试剂盒(美国abi公司)同时扩增d8sl17
9、d21sll、d7s8
20、
( f1p0、193s135
8、tho
1、d13s3
17、d16s53
9、d2s133
8、
d19s43
3、vwa、tpox、d18s5
1、d5s8
18、fga等15个位点和性
别位点amelogenin,扩增产物在abi310遗传分析仪上进行电泳
分离,genescan~3.0软件分析结果,genotypern 2.5软件进行基
因分型。
结 果
一
、样品分型
样品分型结果见表1。
表1 样品分型结果
二、结果分析
结果分析方法参照文献[2]。
(一)确定是否有混合样品
1.根据谱带数目。正常情况下进行常染色体str分型时,
纯合子应检出一条带,杂合子检出2条带,混合样品会出现谱带
数目增多。4号样品在d8sl179等3个位点检出4个等位基因
(表现为4条谱带),在d21s11等6个位点检出3条谱带,提示
该样品为混合样品。
2.等位基因峰面积的不对称。理论上对于杂合子来说,两
个等位基因的峰面积应大致相等,比例接近于1;而混合样品由
于等位基因的叠加,可能会出现不正常的杂合子现象,两个等位
基因的峰面积差异会增大。表2列出了混合比例为1:
10、1:
1、
10:1时出现2个等位基因时峰面积的比例。4号样品在th0
1、
d13s3
17、tpox、d18s5
1、amelogene等位点均检出2条带,类似
杂合子,但2条带的峰面积明显不平衡(见表3),同样提示4号
样本为混合样本,且为男女混合。
(二)确定混合样品中供体的数目
样品4所有位点出现的等位基因数最多为4个,提示供体数
为2个。
(三)确定混合样品中各供体的基因型组合
对于杂合子来说,两个等位基因的峰面积应大致相等,比例
接近于1。基于此原理,分析者可以通过观察到的峰面积来推断
可能的基因型组合和各组分的比例。对确定是二供体组成的混
合样本来说,分型结果可以表现为一带型、二带型、三带型或四
带型。除一带型外,其余各种表现均可提供基因型组合的信息。
其中.四带型由于直观地表现出2个供体的基因型,所以最易于
通过其推断2个供体的基因型组合及其比例。
假设某一位点出现的4个等位基因依片段由小到大的顺序
定为a、b、c、d,观察到的面积分别为paa、pab、pac、pad,定义
mx为所有位点都接近相等,然后给出一个估计的混合比例
(mx),如果解释正确的话,观察值和期望值应接近,这对任意基
因型组合可用峰面积的剩余值eq来检验,峰面积的剩余值eq=
σ(pa观察值一pa期望值) ,峰面积的剩余值越低,该基因型组
合的可能性越高。以4号样品的d8sl179位点为例,混合物中
检出10(a)、14(b)、15(c)、16(d),据eq值可推断混合比例
(mx)bc/ad=0.62,相反混合比例(mx)ad/bc =0.38,其他的
基因型组合(如ab,cd)不可能存在,因为eq不可能接近零。
表4列出了对出现4个等位基因的位点的分析,在列出某个
位点的所有可能的基因型组合后,计算他们各自的eq值,将eq
值最小的基因型组合作为推断的基因型组合列入表4中。
取表4计算出的mx的平均值0.36,并定义mx为所有位点
都接近相等,计算各位点的eq值,见表4。
可以看出取mx的平均值后,各位点的eq值变化不大
· 52 ·
分析出现3个等位基因比出现4个等位基因的模式复杂的
多,因为排列组合更多,不过可应用同样原则。除部分位点可推
断基因型并推断各组分比例,大部分出现3个等位基因的位点
只能推断各组分的多少而不能计算出具体数
值。
法律与医学杂志2004年第ll卷(第l期)
取表l计算出的mx的平均值0.36,并定义mx为昕有位点
都接近相等,计算各位点推断基因型组合的eq值,表5列出eq
为最小值时的基因型组合。
表2 出现2个等位基因时峰面积的比例的分析
表3 出现2个等位基因的位点的分析
表4 出现4个等位基因的位点的分析
表5 出现3个等位基因的位点的分析
律与医学杂志2004年第11卷(第1期)
表6 混合样品各组分基因型的推断结果
· 53 ·
从单个str位点等位基因峰面积计算得出的混合物比例
mx通常可应用于所有位点,但当某几个位点可以推断基因型组
合并推断混合物比例时,取mx的平均值去验证各位点的eq值
显得更为准确。
组分的比例越悬殊,基因型组合越易鉴别,比例越接近,可
能的基因型组合越多,越难判断。需注意的是峰面积值太低(<
1 000个单位)时判型不准确,应通过增加或减少dna样品浓
度、增加电泳上样浓度、增加电泳进样时间等方法来提高峰面积
及增加相应峰的平衡,使峰面积更好地反映混合样品中各组分
的dna比例。研究表明,当混合比例为1:10和10:1时,较少组
分的等位基因峰面积已接近与主要组分等位基因的“stutter”峰
面积⋯ ,所以混合比例过分悬殊时,分析应多加注意。
根据上述计算、分析推断得出样品4的混合物比例为0.36,
基因型组合见表6,可以看出组分1有8个str位点与嫌疑人1
基因型相同,可达认定。而组分二则有8个str位点与事主基
因型相同。在vwa位点中,18/
18、14/17的基因型组合eq值经
计算为0.013 9,并非最小,可能由于等位基因扩增不平衡所致。
讨 论
本文利用峰面积对两组份的简单混合斑进行分析,方法简
单,贯穿推断过程的是各等位基因的峰面积剩余值要接近于零,
峰面积的剩余值越低,该基因型组合的可能性越高。(1)在确定
样本为两组份的简单混合物后,通过出现4个等位基因的位点
的各峰的峰面积推断可能的基因型组合和该组合的混合比例,
取平均值。(2)利用此混合比例平均值对出现3个等位基因的
位点和性别位点进行分析,推断出可能的基因型组合和性别组
合。(3)将推断出的各组分基因型与相关样品基因型比对:(4)
需注意的是扩增时混合物dna 的浓度应控制在一个合适的范
围,使各等位基因扩增尽量平衡,这样结果更准确。(5)应尽可
能多做几个位点,位点越多,信息量越大,认定的几率也越大。
(6)分析时尽量进行盲分析,这样可以保证分析的可重复性和科
学性,可能会有个别位点出现错误,可将该位点去除或进行修
正。
参考文献
[1]郑秀芬,纪贵金,刘超,等.二组份混合dna样品str图谱解释中国
法医学杂志,2001,15(4):203~207
[2]gill p,sparker r,pinchin r,et a1.interpreting simple str mixtures us
ing allele peak areas forensic sci inter,1998,91(1):41~53
[3]公安部物证编写组.法医物证检验技术与应用北京:人民法院出版
社.1997 333~334
(收稿;2003—06—13,修回;2003—07—27)
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