SD大鼠闭合性小脑挫伤的透射电镜观察

[腹部闭合性损伤胰腺断裂1例]【关键词】闭合性损伤；胰腺断裂伤【中图分类号】d919．4 【文献标识码】b 【文章编号】1007—9297(2006)02—0157—02 胰腺属腹膜后器官，受到较好的保护。在腹部损伤尤其是腹...+阅读

【摘要】目的探讨闭合性小脑挫伤病变发生发展过程。方法建立闭合性小脑挫伤动物模型，分别于损伤后

不同时间组5 min、10 min、30 min、45 min、60 min、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h与正常组对照，观察其电镜变化。结果损伤

后不同时间组，小脑蒲肯野氏细胞线粒体水肿、空泡化从轻到重，

线粒体嵴逐渐消失。神经纤维髓鞘疏松断裂，神经原丝

及微管结构模糊，并随着时间推移，其损伤越来越重。损伤后30min，线粒体胞浆中充满了游离核糖体。损伤后1～2小

时小脑蒲肯野氏细胞胞浆浓缩，细胞核开始发生染色质边集。个别细胞核发生核溶解。至4～6小时小脑蒲肯野氏细胞

细胞核坏死发展到高峰，然后逐渐减轻。损伤后8小时，小脑血管内皮细胞线粒体水肿，嵴消失，神经纤维髓鞘松解，胶

质细胞核周间隙扩张。结论闭合性小脑挫伤后不同时间电镜变化，为早期损伤时间推断的法医学鉴定提供了病理

学基础。

【关键词】小脑挫伤；电镜

【中图分类号】d919．1；r392．3

【文献标识码】a

【文章编号】1007—9297(2004)02—0126—03

tem observations of closed cerebeilum concussion in sd rats．li xing-biao ，hu ” ．lin ke-zhi．department of

pathology，wenzhou medical college，wenzhou，zh~iang province 325027

【abstract】objective to explore the pathogenesis of closed cerebellum concussion in sd rats． methods animal model of

clos ed cerebellum concusion in sd rats were established，the samples was taken at 5 m in，10 rain，30 m in，45 m in，60 min，2 h，

4 h，8 h，12 h after injury respectively，tissue changes in injury group were observed under electron microscope pared with

norma1． results at earler post—injury stage such as 5 min，10 min，30 min，45 min，60 min，2 h，vacuole and edema of mito—

chondria as well as disappeared mitochondria crista bee increasingly serious in purkinje cells．myelinolysis such as myelin

loose and rupture in partly，and the structure obscure of neurofibrhs and microtube were seen in time—depended ．m ter injury 1

～ 2 h，purkinje cells of plasma began concentrated ．cellular nucleus began to happen chromatin margination．a few of cellular

nucleus was karyolysis．the peak of cellular necrosis was found at post—injury 4～6 h．m ter injury 8 h．mitochondria edema

and crista disappearance in vascular epithelium cells was observed ．in addition to，loose m yelin of nerve fibers and expansion as—

trocyte interval were also observed． conclusion this experiment results provides the pathological basis for forensic investiga—

tion of clos ed cerebellum concusion in early stage．

【key words】 cerebellum concusion；electron microscope

闭合性脑挫伤的早期损伤时间推断是法医学鉴定的重点和

难点。bakey等用透射电镜(tem)研究大脑脑震荡后脑干早

期损伤和汪秉康等用扫描电镜(sem)研究脑皮质挫伤区和脑

干病变及于晓军等。

用扫描电镜(sem)研究大脑挫伤病变。电

本研究系浙省温州市科委课题($2002a071)

镜应用于大脑、脑干病变变化报告文章较多，而用于研究闭合性

小脑挫伤病理变化报告文章较少。本实验通过建立sd大鼠闭

合性小脑挫伤动物系列模型和透射电镜观察，研究早期损伤时

间推断。

i去律与医学杂志2004年第li卷(第2期)

材料与方法

一

、实验动物、动物分组和动物模型制备

健康、成年、清洁级sd大鼠55只(由温州医学院动物实验

中心提供)．体重250～300 g，雌雄不限将55只大白鼠随机分

为11组，生前损伤不同时间组．分别为5 rain，10 rain，30 rain．46

mln，60 min．2 h．4 h．6 h．8 h，然后与正常对照组相比较．每组大

鼠各5只。

二、小脑损伤模型制备

参照文献· 提供的方密，自制自由落体撞击法致大鼠小

脑挫伤模型装置 2％戊巴比妥钠按4omi g腹腔内注射麻醉，

木前处理后．于头正中切开头皮4 cm．弱离右铡颅顶骨膜．用牙

钻在冠状箍后及中线旁钻一直径为3 cm骨窟．暴露硬脑膜井保

持其完整，用自由落体装置直接撞击大脑瓢叶、顶叶硬脑膜即

用100 g砝码从100咖高处坠落+撞击于硬脑膜外的圆柱体(5

mm) 记录不同损伤组打击时间，骨膜封用骨窗．缝台皮肤正

常对照组sd犬鼠不作任何处理，立即断颈处死

三组织块光镜和电镜取材

在损伤后规定时间，用脱臼的方法使大鼠颈髓损伤致死

取出小脑组织，冠状面切开取小脑挫伤剖缘处大小l n州×1

mm x】mm组织块，立即投入4℃ 冰箱已预拎的2 5％戍二醛固

定渡作前固定．然后投入l0％锇酸固定液作后固定．epon8]2包

埋．lkb—v型超薄切片机切片．h一600型透射电镜观察其余

小脑组织全部用10％福尔马林固定。石蜡包埋．常规切片，he染

色光镜观寨。取正常组小脑组织块用上述同样方法取材作对

照。

结果

一

、he染色组数学观察

大鼠小脑皮质小灶性挫裂伤伴出血，未见炎细胞浸润部

分小脑蒲肯野氏细胞脱落、缺损细胞体积肿大，胞浆尼氏小体

溶解消失．拔固缩呈三角形，部分神经颗粒层细胞疏松水肿．并

随着损伤时间延长而逐渐加重。

=、透射电镜观宴

小瞳挫伤的超薄切片定位于小脑挫伤区创缘处。损伤后5

min，小脑蒲肯野氏细胞核周胞浆见大量棱糖体，线粒体密集，太

小均匀，树突胞浆线粒体和细胞榱无明显变化，神经纤维髓鞘之

间有裂瞰损伤后t0 min，神经纤维髓鞘部分疏论断裂，神经原

丝及徽管结构模糊．无髓鞘神经纤维的轴突及轴突错结构尚可

见(照片¨ 损伤后30 m}n，小瞳蒲肯野氏细胞绒粒体部分轻窿

水肿．脑浆中充满了擗离核铸体(照片2)。损伤后45 min．小帖

蒲肯野氏细胞线粒体不同程度水肿，蝽断裂，神经纤维髓鞘部分

疏松．神经丝、神经管模糊不清(照片3)。损伤后60 min，小脑蒲

肯野氏细胞棱异质增多．不规豇4，细胞棱染色质边集现象损伤

后2 h．小脑蒲肯野氏细瞻艟浆浓缩，细胞校固缩及染色质边集

较损伤后60 min明显．个别纲胞棱发生溶解．滑面内质网扩张。

损伤后4～6 h，细胞棱坏死发展到高峰损伤后8 h．小脑血管

内皮细胞线粒体水肿，嵴消失神经纤维髓鞘松解．瞳质细胞核

周间隙扩张(舅li片4)。正常小脑对照组神经细胞的超微结构无

髓鞘神经纤维及其四周少数睦质细胞无明显异常(照片5)

讨论

根据郭景元" 的观点，小脑脑挫伤发生机制有4种解释：

(1)因脑在颅腔内强力移动与旋转时的剪力变形；(2)因运动肴

· l27

的头颅突然受阻而呈相对静止或在颅骨变形的瞬问，脑自着力

点颅骨内面猛然移开所产生的负压吸引作用；(3)因颊骨变形，

使外力作用的直径被压缩变短，脑受对面的颅骨所反击；(4)在

颅骨受外伤局部变形的过程中．外力作用于脑时，其传递渡通过

瞄组织，使之产生直线加速运动而冲击于对铡颅骨内面或硬脑

膜隔镰上。

朋片i 损伤后i c’分钟．小齄蒲肯野氏蝈胞有■ 鞘部分醺桩断疆．

神经愿纤堆结构模糊不清．无■ 辅神叠的轴亮殛轴宾鞠雏构尚可

见 emx 25 oo0【f'#h件l after hry 10 mln．myelin lni~urk|n·

je cells h密蚰10惦e and ruptured in psrt ．slructure or neurofibril

0h目孵．struclure 0r neurtle andmyelin’s nee,rilein non—myellhated

nerve fibers w el$clearly s ．1

徐英含认为．脑挫伤发生机制为变速运动．这种变速运动

可分直线变速运动和角变速运动．即旋转。当头部发生变速运

动时，颅脑内容物就发生相对移动或滑动．这时高低不平及边缘

锐利的前、中颅窝，蝶骨睛，大脑镰及小脑天幕游离绿等处，损伤

邻近的峙组织。本实验通过自由落体装置撞击大脑鞭叶、顶叶

硬脑膜引起小脑挫伤发生机制考虑为小骑在颅腔内移动或滑动

引起变速运动直接损伤小脑组织。

在变通事故或刑事凶杀案件中，颅脑损伤昧太赫挫伤外，小

脑挫伤亦占有一定比例。王君宇等研制弥漫性脑损伤(dai)

台并局灶性脑挫伤的动物模型．电镜显示dai合并局灶性脑挫

伤的动物模型，电镜显示dai合井脑挫伤有髓神经纤维节断性

晦大．轴突内神经微丝排列混乱，髓鞘板层呈松散空泡变。 key

等⋯ 用透射电镜(1．em)研究大鼠脑干病变最重要是线粒体水

肿、空泡变．其绒粒体变化始于伤后0 5h，ih达高峰，24h恢复正

常汪秉康等用扫描电镜(sem)观察大脑皮质挫伤远区可见

神经纲咆甜突折断，轴索排列紊乱断裂、粗细不等，断端不规

则，部分断端可见球形扩大．髓鞘变性．表面粗糙．呈筛孔状，有

的坏死脱落，至轴索裸露，有的可见星形细胞附着在毛细血管壁

的星板有断裂干晓军等亦甩扫描电镜(sem)观察，太鼠脑

震荡性损伤后病变为全脑弥漫性神经纤维排列紊乱扭曲，波浪

状变形和断裂，髓鞘脱落或袖套样剥离，轴索肿胀。轴索斯端收

缩球形成，冲经纤维表面颗粒状隆起．神经细胞球形肿胀．神经

细胞膜穿孔状破裂．神经细胞膜表面突触脱失或减少，脑实质血

管壁破裂穿孔本实验通过光镜电镜观察小脑蒲肯野氏细胞胞

紧中线粒体、核精体、内质网、神经纤维髓鞘变化及细胞棱改变，

其损伤后不同时间电镜形态学改变均不相同．井随着损伤时间

推移．其病变逐渐加重．特别是小脑挫伤后4h内．he．染色光镜

l28 ·

观察难以鉴别，其电镱形态学改变可作为早期小脑损伤时间推

新客观证据。

尽量减少影响本实验的各种因素：(1)准确把握标车处理时

间；(2)取出小脑组织块做电镜标本是一定要定位于小脑挫伤区

刨缘处．其取材处渗血越少越好

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大学学报，2000 25(31：233—237

(收稿：2003—09 15；悟圆：2004—03一i6)

作者单位：蕾州医学院法医学教研宣。新江蕾州325027

照片2 拯伤后30分钟．小陆蒲肯野氏细胞娃粒体部分轻度水肿．胞浆中充满了游离棱慵体 em x 35 000 厢片3 撮伤后45分钟．小

脑蒲青野氏细胞战耻体不同程度水肿．堵断剩．有■ 神经纤堆赡鞘部分疏橙．神经原纤堆氆朔不j膏。em×40 000 厢片4 撮伤后8小时。

小赡血管内皮蛔胞蝮粒体水肿．斜消失．有■神经纤维矗鞘栓解．艘质细胞棱周间酿扩晨。em×25 000 厢片5 正常小植对翩蛆神照细

触的超蠢结构无■蔫神经纤罐及其用童少数腔质细胞无明显异常=em×6 000 figure 2 after埘m-y 30 min．some ll曲i mitoehondrla

edemm in eerel~llm pi -dⅱje celts w丑丑9een．vree rib惦 s fullne锚in cellular pti~llua． i 3 after iiiiury 45 mln。mitoehondrta~de．

nm in different degree and crista邝pture were developed in cerebellum purklnje cells．myelin hmse in myeltnated nclwe|ll t's and structure obeure．

of nem'onbrll㈣found figm'e 4 after injury 8 h．mitocl~mdha edema and crlsta disappearance in va# jar eptthelium cells or cerebellum

were occm'red．myelin j he of n~elinmed ne~．e ni’ 5 and expansion口stm te interval also observed． i1gurc 5 mista-ostructure of nor．

real畔 h ilum ~xe cells-doll myelinated i~rve fibers and sm kr astr~yle w地norma1