文章标题：浅谈红曲米中七株红曲霉纯培养的分离鉴定

摘要：从广西武宣地区的红曲米中分纯得到7株红曲霉纯培养。初步鉴定分属3类：M-

1、M-

2、M-6属于紫色红曲霉类，M-

4、M-5属于红色红曲霉类，M-

3、M-7属于丛毛状红曲霉类。发现M-1菌株具有较为突出的红曲色素产生能力，通过形态观察和耐酒精、耐NaCl实验，对M-1菌株

进行了种的鉴定。关键词：红曲米；红曲霉；分纯；鉴定中图分类号：TS201.3文献标识码：A自1884年VanTieghen首次分离出红曲霉，至今已有百年的历史。近几年红曲霉的许多功效相继被证实后，红曲菌的相关专利陆续出现。自1975年至1997年为止各国关于红曲霉的专利将近200篇[1]。目前红曲色素应用是红曲研究的主要方向，近20年有近40的专利都在此领域。1979年红曲霉被发现可产生胆固醇合成抑制剂，红曲霉降血糖、血压及胆固醇功效即成为众人关注的焦点[2]。另外作为食品添加剂也是红曲应用的主要方向，有关添加红曲成为功能性食品的专利有31篇，且多在日本申请。还有用于生产各种酶的专利15篇，以及在化妆品、处理废水、饲料上的应用[3]。对红曲霉的研究已从红曲色素扩展到有关降血压、血糖及胆固醇，红曲霉抗菌作用等多个方面。本论文报道了对广西所产红曲米中红曲霉的分离纯化工作。对广西武宣一带的红曲米中的红曲霉进行分纯，得到了7个纯培养，进行了属的鉴定。发现其中一株有较为突出的抗菌能力（另文发表）；还有一株有较为突出的产红曲色素能力。研究成果扩大了红曲霉的菌种库，为发掘红曲霉生物资源做了有益工作。1实验材料1.1红曲米：取自广西武宣地区，是居民制作红糟酸所用的发酵剂。1.2培养基：富集活化液：120Bx米曲汁900mL，乳酸7mL，无水乙醇100mL，于121℃灭菌20min，使用时以无菌操作加入30ppm链霉素。分纯培养基:120Bx米曲汁900mL，6％NaCl，2％琼脂，121℃灭菌30min。2研究方法2.1红曲霉的分纯与鉴定：取红曲米25粒放入100mL富集活化液中，30℃培养５天。采用米曲琼脂汁培养基，对数稀释倾注法分纯。以无菌操作将生长迅速、健壮的菌落，挑取放到富集活化液中继续富集活化，待培养5天后重复上述分纯操作，经过多次操作就可以分离得到红曲霉纯培养。通过菌落形态、菌丝体形态观察，耐酒精、耐NaCl实验，进行红曲霉纯培养的鉴定。2.2红曲霉产红曲色素的研究：用米曲汁培养基，遮光，32℃，160r/min培养六天。用分光光度法测定总色价。3实验结果3.1红曲霉的富集活化活化培养的第二天，红曲米开始有附着的白色菌丝；第三天红曲米上浮，米身附着大量菌丝；第四天红曲米全部上浮，菌丝开始粘连；五天以后出现白色菌膜；七八天后白色菌膜转变为红色。根据菌体质量测定，红曲霉生长对数期大约处于第

五、第六天，最适合用作接种材料。3.2红曲霉的分离鉴定：3.2.1菌落形态特征。红曲霉培养初期都为白色小菌落，经过培养后，菌落开始老熟，表面的颜色变化比较丰富，有的菌落颜色开始改变，逐渐变成橙色、浅蓝色、灰色、铅灰色和灰白色等；菌落的主要形状为皮膜状和绒毯状，大多菌落有放射状的沟纹，边沿一般比较整齐。得到7个纯培养，菌落特征见表1。表1 7株红曲霉纯培养的菌落形态菌株菌落大小正面形态皱折颜色侧面观背面颜色编号(mm)M-138圆形绒垫状辐射状红色凸起深红色M-220圆形皮膜状有皱折白色不凸起红色M-338圆形绒垫状辐射状橙色凸起橙色M-440圆形皮膜状辐射状白绿灰① 不明显橙色M-529圆形皮膜状不明显白铅绿②不凸起橙色M-620圆形皮膜状不明显白绿③不凸起橙色M-742圆形绒垫状不明显白色不凸起橙色注:①菌落从里至外为三个色环，颜色依次为灰色、绿色和白色；②菌落从里至外为两个色环，颜色依次为灰色和白色；③菌落从里至外为两个色环，颜色依次为绿色和白色。3.2.2个体形态特征。30℃培养3天的红曲霉纯培养，用手术刀切取大小约1×1ｍｍ的菌苔，制成水浸片，镜检观察个体形态，7个菌株均观察到细胞横隔，有足细胞，梨形的分生孢子，有的还观察到闭囊壳结构．如图1。注：气生菌丝和足细胞注：分杈菌丝注：闭囊壳图1 红曲霉的个体形态图（640×）3.2.3曲霉纯培养的分类根据以上形态观察结果，将７株纯培养鉴定为红曲霉属[4]。根据1992年ATCC真菌目录，红曲霉菌主要可分为三大类。按照文献的检索方法对所得的7个菌株进行12全文查看测定后，分类结果见表2。表2７株红曲霉纯培养的分类结果类别MEA上菌落直径（mm）色素颗粒菌株编号M.purpureur