[开胃进食汤超微配方颗粒对正常小鼠胃肠动力的影响论文]目的 研究开胃进食汤超微配方颗粒对正常小鼠胃排空、小肠推进活动的影响。方法 采用开胃进食汤传统汤剂和健胃消食片对照，观察开胃进食汤超微配方的等倍、１／２倍和１／４倍不同剂量对小...+阅读

目的 观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。方法 选用雄性昆明种小鼠，随机分为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组（含生药２．５ ｇ／ｋｇ）及生晒参超微饮片１／２剂量组（含生药１．２５ ｇ／ｋｇ），采用利血平法制备脾虚动物模型，分别给予生理盐水、生晒参超微滤液及生晒参传统汤剂，造模及给药后处死小鼠，取小肠空肠段作光镜ＨＥ染色观察小鼠小肠黏膜形态改变，电镜观察小肠超微结构变化。结果 用药后生晒参超微饮片全剂量组能明显改善脾虚小鼠小肠上皮微绒毛，改善细胞质和细胞器结构，有显著的修复作用。结论 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜的修复作用优于生晒参传统汤剂。

脾虚证是中医常见证型，可见于消化系统多种疾病，现代研究表明，中医的脾本质是以消化系统为主的多系统功能综合单位，脾虚主要表现在小肠功能的改变［１］。小肠既是药物吸收的主要场所，又是脾虚证主要病变部位，且人参具有益气健脾之功效。基于此，本研究旨在观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。

１ 材料与方法

１．１ 材料

１．１．１ 动物 健康雄性昆明种小鼠，清洁级，体质量（２０２） ｇ，由湖南中医药大学实验动物中心提供，合格证号：医动字号２０－００２。

１．１．２ 药物 购置生晒参药材，由湖南省中药超微工程技术中心检测合格后，按有关工艺分别加工为超微和传统饮片。传统饮片第１次煎加水５００ ｍＬ，煎汁１５０ ｍＬ，第２次煎加水３００ ｍＬ，煎汁１５０ ｍＬ，将两次煎液混匀；超微饮片先６０ ℃开水１ ０００ ｍＬ搅拌，静止１０ ｍｉｎ，纱布过滤取上清液，再加水１ ０００ ｍＬ，如前取上清液，两次煎液混匀。将传统饮片及超微滤液分别浓缩成每毫升含生药１ ｇ，冷藏备用。

１．１．３ 试剂与仪器 利血平注射液，广东邦民有限公司产（批号：０４０６２０，规格：１ ｍL／ｍｇ）；ＢＸ－５１光学显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司），８８００型超薄切片机（ＬＫＢ公司）， Ｈ－６００透射电镜（日立公司）。

１．２ 方法

１．２．１ 动物分组与造模 将小鼠随机分为５组，分别为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组（含生药２．５ ｇ／ｋｇ）及生晒参超微饮片１／２剂量组（含生药１．２５ ｇ／ｋｇ）。除正常组外，余４组采用利血平法制备脾虚动物模型［２］，即按皮下注射利血平０．２５ ｍｇ／ｍＬ每天１次，连续注射１４ ｄ。

１．２．２ 给药方法 模型制备成功后，空白对照组灌胃生理盐水２０ ｍＬ／（ｋｇｄ），生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组均灌胃含生药２．５ ｇ／ｋｇ（按成人７０ ｋｇ体质量每次服用１０ ｇ折算２倍量给药），生晒参超微饮片１／２剂量组灌胃含生药１．２５ ｇ／ｋｇ，连续给药１２ ｄ。

１．２．３ 观察方法 造模及给药后分别脱颈处死小鼠，取小肠空肠段，经０．０１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ冲洗后，作光镜、电镜观察。

１．２．４ 光镜标本制备 处死动物后，取空肠１ ｃｍ组织，４％多聚甲醛固定２４ ｈ，常规脱水，沿纵轴方向石蜡包埋，切片ＨＥ染色，光镜观察。

１．２．５ 透射电镜标本制备 样品经２．５％戊二醛固定后，０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ漂洗，１％锇酸后固定，０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ漂洗，丙酮逐级脱水（浓度为５０%、７０%、９０%、１００％）后，Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂与１００％丙酮１∶１比例浸泡，Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂浸泡、包埋，ＬＫＢ公司８８００型超薄切片机切片，醋酸铀、硝酸铝双重染色后，日立Ｈ－６００透射电镜观察。

２ 结果

２．１ 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响

正常组未见任何病理性变化，小肠绒毛结构正常，黏膜上皮无变化，固有膜正常，肠腺无改变（见图１①）。模型制备成功后，脾虚小鼠小肠绒毛变细变短，肠上皮变矮，柱状上皮立方形改变，固有膜空泡样改变（见图１②）。生晒参超微饮片全剂量组与正常对照组的组织学观察基本一致（见图１③④），生晒参超微饮片1/2剂量组小肠黏膜改变趋于正常（见图１⑤⑥）。生晒参汤剂组：小肠绒毛基本正常，上皮部分稀散不完整，肠腺变小，可发现弥散淋巴组织，游离面上皮立方形改变，固有膜空泡样改变（见图１⑦）。空白对照组小肠绒毛及肠腺基本正常，游离面绒毛上皮松散。柱状上皮立方形改变，固有膜松散，空泡样改变（见图１⑧）。

２．２ 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜超微结构的影响

正常组表面微绒毛丰富，排列规则整齐，胞浆内线粒体丰富（见图２①），固有结构正常（见图２②）。脾虚模型组上皮细胞轻度肿胀，微绒毛略显稀疏，胞浆线粒体肿胀，嵴丢失呈空泡变，固有膜局灶水肿，细胞水肿空泡样变（见图２③）。由此可见，正常组与脾虚模型组有显著差异，证明脾虚模型制备成功。生晒参超微饮片全剂量组，细胞结构趋于正常，上皮细胞内可见散在颗粒（见图２④⑤）。生晒参超微饮片１／２剂量组，病变基本同生晒参超微饮片全剂量组，绒毛略比正常稀疏，胞浆内部分线粒体有轻度肿胀，嵴较松散，上皮细胞内见散在圆形颗粒，固有膜改变不明显（见图２⑥）。生晒参汤剂组，上皮细胞变矮，细胞间隙不清晰，微绒毛变短，胞浆内线粒体丰富，部分结构不清晰，固有膜改变不明显（见图２⑦）。空白对照组，上皮细胞柱状，微绒毛基本整齐，固有膜仅见局灶细胞间隙有增宽，腺细胞内见丰富的溶酶体，亦可见少数腺细胞有固缩，呈凋亡改变（见图２⑧）。

３ 讨论

脾虚小鼠出现的腹泻症状及光镜下小肠组织损伤等表现，说明脾虚与小肠黏膜有相关联系。《素问经脉别论》曰：人以水谷为本，故人绝水谷则死，脉无胃气亦死，小肠黏膜上皮在机体消化过程中主要发挥消化和吸收功能，其微绒毛及细胞质内线粒体内质网与消化吸收密切相关［３］。小肠上皮黏膜形态学改变及小肠上皮细胞超微结构的改变，亦是反映模型是否制备成功的指标之一。由此可见，小肠尤其是其超微结构是机体对物质的吸收、消化与转运的重要场所之一。

中药超微饮片是一种新型的中药饮片，它采用超微粉体等先进技术将中药材超微细粉化，其微粉粒径在１～７５ uｍ，能保持传统中药固有药效学物质基础的粒度。细胞破壁率达９０％以上的中药超微饮片［４］，能大大提高中药成分的利用率，减少中药资源的浪费。中医认为，人参味甘、微苦，入脾、肺、心经，有大补元气，补益脾肺，生津安神之功，为健脾益气之要品。前期研究发现人参大、中、小粒径超微粉Ｒｇ１含量均高于人参饮片，说明人参类药材经超微粉碎后人参皂苷类成分的浸出明显优于其传统饮片［５］。

本试验用利血平法造模后，光镜下显示，脾虚小鼠小肠绒毛变细变短，柱状上皮立方形改变，固有膜空泡样改变。透射电镜下显示，脾虚模型小鼠小肠上皮细胞微绒毛稀疏，细胞轻度肿胀，胞浆内部分线粒体肿胀，嵴丢失呈空泡样，固有膜局灶水肿，细胞水肿空泡变等病理改变。这说明脾虚可导致小肠超微结构发生病理改变。运用生晒参后，在透射电镜及光镜下观察，不同剂型的生晒参均能改善脾虚小鼠小肠上皮微绒毛，改善细胞质和细胞器结构，对小肠黏膜有不同程度的修复作用。尤其是生晒参超微饮片全剂量组的小肠上皮组织结构趋于正常，据实验结果，生晒参超微饮片全剂量组的小肠黏膜结构的复健效果明显优于生晒参汤剂组。同时在电镜下观察发现生晒参超微饮片全剂量组的小肠黏膜表面附着的微束颗粒比生晒参汤剂组的多，这可能是微米中药制剂所含的药物粉末直接通过胞饮进入细胞比传统汤剂多，说明超微中药制剂比传统中药制剂可以增加吸收速率和吸收量。研究表明，生晒参超微饮片１／２剂量组对小肠黏膜的修复作用略逊于生晒参超微饮片全剂量组，但与生晒参汤剂组作用相近。生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响论文