[有关药物研究中蛋白质组学的研究]很多学生第一次写毕业论文往往有盲目性和轻视心理。不知道如何入手写论文,也不清楚格式要求。加之临近毕业都在忙着找工作或者到处找实习单位,而无暇顾及编写论文,最后往往导致...+阅读
基因组的序列信息并不足以解释及推测细胞的各种生命现象,蛋白质才是细胞活性及功能的最终执行者,蛋白质之间复杂的相互作用决定着生物体的复杂程度,你可以到生物帮那里了解,那儿提供最新、领先、精准、高效、全面的生物产品和技术信息。我在生物帮上看到过5种蛋白质研究方法的介绍。
免疫共沉淀是证明蛋白质-蛋白质相互作用的最直接最经典和最有效的方法,如蛋白A能与B相互作用结合成异源二聚体,无论用抗A或抗B的抗体或与A或B的亲和物偶联的agarose小珠都能把A和B沉淀下来。因此广泛用于蛋白质相互作用研究。
可以参考:
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酵母双杂交系统
基本原理,以酵母S.cerevisiae的转录因子GAL4系统为例
GAL4有两个结构上互相分开,功能上相互独立的结构域。
N 端1-147aa与DNA结合(DNA binding domain,BD)。
C端768-881aa能激活转录(Activation Domain,AD)。
BD+AD—能激活GAL4效应基因的上游激活序列(UAS)。
把N和C分开分别构建成两种表达质粒。如把Gal4的N端和诱饵蛋白(研究的目标蛋白A)融合表达,把细胞cDNA和C端融合表达,cDNA编码的蛋白x如能和A互相作用,就能把Gal4N端C端和N端联系在一起,就可以激活UAS下游的基因表达。
半乳糖苷酶(Laz)基因克隆到URA3的下游。
在x-Gal的存在下酵母菌落成蓝色(Fields)
酵母GAL4基因缺失;GAL80基因缺失(GAL4的负调控因子)
假阳性多,因此还必须再用免疫共沉淀等直接证据证明
发展:哺乳动物双杂交系统、二倍体双杂交系统、酵母单杂交系统、细菌双杂交系统、酵母三杂交系统
延伸阅读:
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