[简爱中的好句要有赏析不能重复必有重谢]1、但是如果你避免不了，就得去忍受.不能忍受命中注定要忍受的事情，就是软弱和愚蠢的表现.赏析：简.爱的好友海伦对她说了一番看似平凡却又含道理的话.面对生活的不公，对于很多事...+阅读

Western样本制备及注意事项

一、Western 实验中细胞的采集、处理和保存

1、贴壁细胞，加1ml PBS清洗，弃上清，加RIPA（六孔板200ul，培养瓶400ul）冰上消化半小时，细胞刮板，将RIPA转移至EP管，用枪吹打细胞RIPA液200次；

2、细胞团块，加1ml PBS重悬细胞，分装至EP管，1000rpm离心5分钟，弃上清，加50ul RIPA冰上消化半小时，用枪吹打细胞RIPA液200次；

3、悬浮细胞或细胞冻存液细胞，转移至EP管，1000rpm离心5分钟，弃上清，加1ml PBS重悬细胞，分装至EP管，1000rpm离心5分钟，弃上清，加50ul RIPA冰上消化半小时，用枪吹打细胞RIPA液200次；

4.保存

上述步骤处理完后，将细胞放入冰箱冻存（尽量避免反复冻融，否则会使样本蛋白降解）

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

二、Western 实验中易碎组织（脑、肝、肾）的采集、处理和保存

1、样品大小50-100mg，按质量体积比1:5加入RIPA;

2、冰水浴中用眼科剪剪碎组织块；

3、冰水浴中电动匀浆机（每个样本20-30s）或超声破碎；

4、保存

上述步骤处理完后，将细胞放入冰箱冻存（尽量避免反复冻融，否则会使样本蛋白降解）

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

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