细胞原代培养和传代培养的区别表格形式

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细胞原代培养和传代培养的区别表格形式

原代细胞（primary cell）是指从机体的组织（如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等）经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。细胞株（cell strain）是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。细胞系（cell line）是原代细胞经首次传代成功后即为细胞系。

泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限，可称为有限细胞系（finite cell line），如可以连续培养，则称为连续细胞系（continuous cell line），培养50代以上并无限培养下去。人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。

原代细胞培养常见问题有哪些

原代细胞培养常见问题的原因及其解决的办法：

1. 培养液pH值变化太快

可能原因

(1)CO2张力不对

(2)培养瓶盖拧得太紧

(3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足

(4)培养液中盐浓度不正确

(5)细菌、酵母或真菌污染

建议解决方法

(1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。

(2)松开瓶盖1/4圈。

(3)改用不依赖CO2培养液。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。

(4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。

(5)丢弃培养物，或用抗生素除菌。

2. 培养液出现沉淀，但pH值不变

可能原因

(1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来

(2)冰冻保存培养液

建议解决方法

(1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。

(2)将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。

3. 培养液出现沉淀，同时pH发生变化

可能原因

细菌或真菌污染

建议解决方法

丢弃培养物，或用抗生素除菌。

4. 培养细胞不贴壁

可能原因

(1)胰蛋白酶消化过度

(2)支原体污染

(3)培养瓶瓶底不干净

(4)培养液pH值过碱（NaHCO3分解）

(5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当

5. 细胞老化

建议解决方法

(1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。

(2)分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

(3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶

(4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）

(5)重新配置消化液或培养液

6. 培养细胞生长减慢

可能原因

(1)由于更换不同培养液或血清

(2)培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。

(3)培养物中有少量细菌或真菌污染

(4)试剂保存不当

(5)接种细胞起始浓度太低

建议解决方法

(1)比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。让细胞逐渐适应新培养液。

(2)换入新鲜配制培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子。

(3)用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。

(4)血清需保存在-5℃到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2周内用完。

(5)增加接种细胞起始浓度

7. 培养细胞死亡

可能原因

(1)培养箱内无CO2

(2)培养箱内温度波动太大

(3)细胞冻存或复苏过程中损伤

(4)培养液渗透压不正确

(5)培养液种有毒代谢产物堆积

建议解决方法

(1)检测培养箱内CO2

(2)检查培养箱内温度

(3)取新的保存细胞种

(4)检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260– 350 mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。

(5)换入新鲜培养液