愈伤组织的培养

[培养愈伤组织为什么要避光]因为植物组织培养中脱分化阶段需要避光培养。光会阻碍组织的脱分化，在无光的条件下愈伤组织长得更快。在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜时可以长出愈伤组织。其发生...+阅读

愈伤组织的培养分为继代培养和分化培养。在外植体上形成以后，愈伤组织的继代培养在已充分发育，但没有出现老化现象之前，应及时从外植体上分离下来，转入继代培养基上进行继代培养。分离是必要的措施，继代培养时若连同外植体就会影响愈伤组织的产量和质量，可能是由于残存的外植体在死亡过程中会产生某些有毒物质，愈伤组织会出现老化、粘化及不正常分化等现象。一般情况下，从外植体上分离的愈伤组织须经过4-6周的培养才能得到充分的发育。为了增殖发育良好的愈伤组织，继代培养是有效的措施。在良好的培养条件下，甘蔗愈伤组织可继代一年以上而不丧失分化能力。

影响甘蔗愈伤组织继代培养的主要因素是激素。为协调继代培养中既要维持愈伤组织增殖生长良好、又要保持愈伤组织的分化能力的矛盾，就必须筛选最佳的激素浓度。有报道指出，2,4-D(2-3mg/L)对保持愈伤组织不分化是有效的，但随继代培养次数的增加，其分化绿苗的能力也随之下降。甘蔗愈伤组织在除去生长素或降低生长素浓度的培养基上，即能发生器官的再分化。在甘蔗的组织培养中，有些品种的愈伤组织对生长素有较强的吸收和分解能力，甚至在含有一定浓度生长素的诱导或继代培养基上亦能迅速分化成苗。影响甘蔗愈伤组织分化成苗的因素有愈伤组织的质量和大小、培养基、光照等。愈伤组织的大小对分化具有明显的影响，接种时愈伤组织块不宜小于5mm。

光照对甘蔗愈伤组织分化绿苗具有较好的促进作用，在无光照条件下分化出的是黄化苗，见光后又会返绿。一般在采光条件好的培养室，用自然散射光就可满足要。在采光差条件的培养室则需加人工辅助光，通常用日光灯为辅助光源，光照强度1500-2000Lx，光照时间12小时。至于培养基对分化的影响，则认为适宜的生长素与细胞分裂素配比有利于甘蔗愈伤组织的绿苗分化。甘蔗不同品种、不同材料愈伤组织的分化所要的最佳激素配比不同，常用的分化培养基是“MS+NAA(0.5-1.5mg/L)+BA(0.5-1.0mg/L)”，也有同时使用IBA(0.5-2.0mg/L)的。组织培养过程中的酚污染会影响培养效果。酚污染程度与外植体细胞的多酚氧化酶活性有关。甘蔗茎尖、嫩茎切段及靠近节处的幼嫩叶鞘均有较高的多酚氧化酶活性，所以这些组织的外植体接种后的酚污染也严重。培养基中添加的细胞分裂素物质有提高多酚氧化酶活性的作用，培养过程中的酚污染程度常随细胞分裂素浓度的提高而加重。在培养基中使用0.1-0.5%的活性碳，有减轻酚污染的作用，也有助于根的形成。

为什么说愈伤组织是最为常见的培养方法

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在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。

愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木与接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木和接穗沟通；在扦插中，从伤口愈伤组织可分化出不定根或不定芽，迸而形成完整植株。在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。其发生过程是：外植体中的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁组织而形成愈伤组织。从植物器官、组织、细胞离体培养所产生的愈伤组织，在一定条件下可进一步诱导器官再生或胚状体而形成植株。在单倍体育种中，也可由花粉产生的愈伤组织或胚状体分化成单倍体植株。甚至可由原生质体培养诱导植株或器官再生。故愈伤组织的概念已不局限于植物体创伤部分的新生组织了。

高中生物：愈伤组织一定要在暗处培养？

愈伤组织的培养分为两个阶段，一是脱分化培养阶段，二是再分化培养阶段。

脱分化培养阶段：由于光会阻碍组织的脱分化，所以脱分化培养阶段应避光培养，在无光的条件下愈伤组织长得更快。脱分化培养阶段一般为2周，然后必须更换培养基进行培养，因为2周后培养基中的营养成分已接近耗尽。

愈伤组织的形成需要避光培养。有光时愈伤组织的形成变慢的原因：

植物细胞在光照条件下会自发进行光合作用，这样的同时还要完成修复，所以比较慢。光合作用结果是生成糖类，但其过程中必然需要分流出一部分物质和能量参与进去，从而使完成修复过程的物质和能量的总量减少，因而变慢。

一般情况下在形成愈伤组织时，如果有光容易导致细胞再分化，不能达到形成大量愈伤组织而在短期时间内获得大量幼苗的目的，但是形成愈伤组织后需要光是为了形成叶绿体。

再分化培养阶段：将良好的愈伤组织转接至分化培养基上进行再分化培养。这时应见光，愈伤组织见光后，颜色可以转为绿色。

所以愈伤组织培养，最初避光培养，后期见光培养。如月季花药培养开始不需要光照，幼小植株形成后才需要光照。胡萝卜也一样开始避光培养，后来见光培养。

不同植物的组织，培养的难易程度差别很大。不同植物对各种条件的要也往往不同。不同植物的组织，培养的难易程度差别很大。不同植物对各种条件的要也往往不同。光对生长和分化有很大影响，这与材料的性质、培养基情况以及由于光照而引起的温度上升等方面因素有关。